Masson 染色方法

     结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson 三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此 Masson 染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。改良 Masson 染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

操作步骤（仅供参考）：

1、 组织固定于 10%的福尔马林中，常规脱水包埋。

2、 切片厚 4μm，常规脱蜡至水。

3、 切片入 Bouin 液，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片上的黄色消失。

4、 天青石蓝染色液滴染 2~3min。

5、 稍水洗。

6、 Mayer 苏木素染色液滴染 2~3min。

7、 稍水洗。

8、 酸性乙醇分化液分化数秒。

9、 流水冲洗 10min。

10、 丽春红品红染色液滴染 10min。

11、 蒸馏水稍冲洗。

12、 磷钼酸溶液处理约 10min。

13、 倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5min。

14、 弱酸溶液处理 2min。

15、 95%的乙醇快速脱水。

16、 无水乙醇脱水 3 次，每次 5~10s。

17、 二甲苯透明 3 次，每次 1~2min。

18、 中性树胶封固。

染色结果：

胶原纤维                                                             蓝色

肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞              红色

胞核                                                                    蓝褐色

注意事项：

1、 切片脱蜡应尽量干净。

2、 酸性乙醇分化液的分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。

3、 磷钼酸溶液的作用一方面是使染上红色的胶原纤维被分化成无色或淡红色，而肌纤维纤维素等仍呈鲜红色；另一方面对胶原纤维又起媒染作用。使胶原纤维与大分子染料的苯胺蓝液较易结合。

4、 苯胺蓝液染色后用弱酸溶液处理，目的是除去原浆内的蓝色，是染色鲜艳和清晰。如 Zenker 液固定的组织，弱酸溶液处理可延长至 5min。

5、 弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自

大鼠睾丸MASSON染色