骨组织脱钙

一、骨组织脱钙程序

1、组织选择性：   脱钙前选择适当 骨组织，锯成薄片，厚度2-5mm

2、固定：常温下固定4-6小时，固定液体积要大于标本体积20-30倍。固定液最好选用可保存欲显示的组织成分的相应固定剂。

3、脱钙：将已固定的骨块置于已选好的脱钙液内进行脱钙，严格控制时间，及时更换新液

4、酸的中和：保护骨组织不过度膨胀，不影响染色质量

5、充分水洗：去酸，为以后脱水，透明，包埋打下基础。

二、脱钙方法

1、鳌合剂法

2、缓冲脱钙液法

3、甲酸-螯合剂脱钙法

4、混合脱钙液法

三、脱钙终点的测定

1、物理检测法：通过针戳、手掐、扭曲等方法测定骨组织的柔软程度

2、X线检测法

3、化学检测法

四、骨脱钙注意事项

1、骨组织脱钙时，取材骨块不宜过厚，一般在5mm以内，以免脱钙时间过长影响染色效果。

2、脱钙液量要充足，一般为标本体积的20-30倍，并经常更换新液

3、脱钙温度在20度左右为佳

4、脱钙时间应尽量缩短，一般不超过3天

5、整个脱钙过程中切忌使用金属容器和器械，尽量采用玻璃器皿

6、脱钙最好先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，因为未经固定的骨组织脱钙产生的破坏程度比固定后的骨组织要大得多。

7、骨在脱钙前最好经脱脂处理，以减少对脱钙进度的影响，脱脂可用95%乙醇或三氯甲烷浸泡

大鼠骨组织HE染色