热休克蛋白90α酶联免疫试剂盒使用说明书
HY-I0009 HSP90α ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
热休克蛋白(heatshockprotein ,HSP)是原核细胞和真核细胞在不良因素作用下所产生的一组特殊蛋白质,广泛存在于生物组织中。根据同源程度及分子量大小,可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60及小分子HSP家族。HSP90 以是否含有丰富的谷氨酰胺片段而分为HSP90α和HSP90β两类,二者分别由730和724 个氨基酸组成,其同源性为84 % ,分别由不同基因编码,其中HSP90α基因位于14q32.3 ,包含11个外显子和10个内含子。HSP90α是细胞内最活跃的分子伴侣之一,广泛参与细胞的信号转导、激素应答及转录调控过程,对细胞在生理、病理及应激条件下的生存发挥了重要作用。在发生应激反应时,HSP90α可以和那些由于环境刺激而使自身构象发生改变的蛋白相互作用,保证蛋白进行适当的折叠并防止其非特异性聚集,从而维持细胞的正常活性。HSP90α能与多种癌基因和抑癌基因产物结合形成异源蛋白复合体,介导其构象成熟及转运,从而参与细胞转化过程。HSP90还在神经元的迁移以及肿瘤的转移中发挥了一定的作用。
样品处理:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月
药盒组成:
1) 酶标试剂HRP 1 瓶
2) HSP90α抗体1瓶
3) HSP90α标准品6瓶:10、20、40、80、160、320pg/ml。
4) 封闭液 1瓶
5) 终止液 1瓶
6) 96微孔板1块
7) 显色液1瓶
8) 稀释液1瓶
9) 洗涤液
10) 说明书
11) 封板膜
12) 密封袋
操作方法:
1) 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):
2) 每孔加入抗体100ul包被2小时
3) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
4) 每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟
5) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
6) 每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀
7) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
8) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
9) 每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟
10) 每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11) 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1) 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2) 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3) 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数
4) 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5) 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6) 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7) 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
1) 手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。
2) 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a) 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
b) 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实
本试剂盒主要技术参数:
标准范围:0-320pg/ml
灵敏度: <1pg/ml
精密度:批内CV<9.5%,批间CV<10%
正常参考值:35.6±4.5 pg/ml
规格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6个月(2-8℃)。
批号:20170910
地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
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