环磷酸鸟苷酶联免疫试剂盒使用说明书
HY-I0018 CGMP ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
环磷酸鸟苷(Cyclic guanosine monophosphate,CGMP) 是一种具有细胞内信息传递作用的第二信使,广泛分布于各种组织中,能激活蛋白激酶G。CGMP与CAMP的作用相反,CGMP有乙酰胆碱的作用,抑制心肌收缩力,降低心率,增加神经兴奋性,刺激白细胞溶酶体释放水解酶,刺激淋巴细胞分裂增殖,抑制糖异生以及兴奋副交感神经的功能。
样品收集:
1、 血样
1) 取静脉血1~2ml,注入含DETA抗凝剂50ul的试管中,摇匀,一小时内离心4℃,2000rpm离心10min,分离血浆, —20℃保存,严禁反复冻融。
2) 血浆处理:取0.1ml血浆加入2ml无水乙醇,振摇1分钟,静置5分钟,3000转/分离心10分钟。将上清液到入指形管或青霉素小瓶,残渣再加入75%乙醇1ml,匀浆,3000rpm离心10分钟。合并上清液,于60℃烤箱中吹干,残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解,然后取0.1ml测量,此时稀释倍数为100。结果×100即为pmol/ml.
2、组织样品处理
取组织50毫克左右放入盛有2ml冷的50mM PH4.75醋酸缓冲液的试管内(冰浴),匀浆,加入2ml无水乙醇,混匀,静止5分钟,3500转离心15分钟,将上清液收集在青霉素小瓶内,再用75%乙醇2ml洗沉淀,匀浆分散,混匀,3500转离心15分钟。合并上清液,60℃烤箱中吹干,残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解,然后取0.1ml测量。
药盒组成:
1) 酶标试剂HRP 1 瓶。
2) CGMP抗体1瓶。
3) CGMP标准品8瓶,浓度0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25、50、100 pmol/ml。
4) 封闭液 1瓶
5) 终止液 1瓶。
6) 96微孔板1块
7) 显色液1瓶。
8) 稀释液1瓶
9) 洗涤液
10) 说明书
11) 封板膜
12) 密封袋
操作方法:
1) 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):
2) 每孔加入抗体100ul包被2小时
3) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
4) 每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟
5) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
6) 每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀
7) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
8) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
9) 每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟
10) 每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11) 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数
4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a) 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
b) 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实
本试剂盒主要技术参数:
标准范围:0-100 pmol/ml
灵敏度: <0.08pmol/ml
精密度:批内CV<7.0 %, 批间CV < 15%
正常参考值:4.6±0.7pmol/ml
规格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6个月(2-8℃)。
批号:20181015
地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所 电话:010-88114651 传真:010-88112680