丝裂原活化蛋白激酶酶联免疫试剂盒使用
MAPK ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是一组能被不同的细胞外刺激,如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。由于MAPK是培养细胞在受到生长因子等丝裂原刺激时被激活而被鉴定的,因而得名。所有的真核细胞都能表达MAPK。MAPK通路的基本组成是一种从酵母到人类都保守的三级激酶模式,包括MAPK激酶激酶(MAP kinase kinase kinase,MKKK)、MAPK激酶(MAP kinase kinase,MKK)和MAPK,这三种激酶能依次激活,共同调节着细胞的生长、分化、对环境的应激适应、炎症反应等多种重要的细胞生理/病理过程。促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAP激酶,MAPK)链是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。MAPK链由3类蛋白激酶MAP3K-MAP2K-MAPK组成,通过依次磷酸化将上游信号传递至下游应答分子。MAPK属于CMGC(CDK/MAPK/GSK3/CLK)激酶组。与MAPKs亲缘关系最近的蛋白是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)。
药盒组成:
1) 酶标试剂HRP 1 瓶。
2) MAPK抗体1瓶。
3) MAPK标准品6瓶浓度为5、10、20、40、80、160 pg/ml。
4) 封闭液 1瓶
5) 终止液 1瓶。
6) 96微孔板1块
7) 显色液1瓶。
8) 包被液1瓶
9) 洗涤液 用时20倍稀释
10) 说明书
11) 封板膜
12) 密封袋
操作方法:
1) 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管用1毫升包被液倍比稀释)
2) 每孔加入抗体100ul包被2小时
3) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
4) 每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟
5) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
6) 每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀
7) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
8) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
9) 每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟
10) 每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11) 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数
4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a) 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
b) 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实
本试剂盒主要技术参数:
标准范围:0-160pg/ml
灵敏度: <0.5pg/ml
精密度:批间变异系数CVw〈8.3% ,批内变异系数CVw〈4.2%
平均回收率:95.6%
正常参考值:60pg/ml
特异性:IL-1β抗血清IL1-а、IL-2、EPO、GM-CSF、TNF等均无交叉反应
规格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6个月(2-8℃)。
批号: 20200110
地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
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