方法学原理 通过钾依赖性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸 （PEP）的酶动力学反应检测钾，其产物丙酮酸盐在 乳酸脱氢酶（LDH）作用下与NADH反应生成NAD+， 其在340nm的吸光值下降与钾浓度呈比例。 --------------- K+ PEP + ADP------------------------＞丙酮酸盐 + ATP -------------丙酮酸激酶（PK） -------------LDH 丙酮酸盐 + NADH+H+--------------＞乳酸 + NAD+ 样品收集处理 血清，或肝素锂抗凝血浆。
试剂成份 成份 实验浓度 R1. 缓冲液/酶底物 Tris缓冲液 250mmol/L,PH8.2 穴合剂 12mmol/L PEP ≥3.3mmol/L ADP ≥3.15mmol/L -酮戊二酸 ≥1.2mmol/L NADH ≥0.35mmol/L GLDH ≥11U/ml PK ≥1.2U/ml R2. 酶/稀释液 LDH ≥65U/ml 标准（低） 见说明书 标准（高） 见说明书
试剂准备 1. 缓冲液/酶/底物 先将适量缓冲液R1a加至酶/底物试剂瓶R1b中，轻轻 旋转使其内容物全部溶解，然后将全部内容物吸至缓 冲液R1a瓶内，再用缓冲液洗瓶R1a几次。 在2-8℃环境下可稳定7天。 2. 酶/稀释液 将部分稀释液R2a加至酶试剂瓶R2b中，轻轻旋转使 其内溶物全部溶解，然后将全部内容物吸至稀释液 R2a瓶内，用少许稀释液洗瓶R2b几次，注意避免产生 泡沫，在2-8℃环境下可稳定2周。
标准1和标准2：所附标准随时可取用，在2-25℃环境 下可稳定至有效期。
手工操作步骤 检测波长 340nm 比色杯 光径为1cm 孵育温度 37℃或30℃ 检测 以试剂为空白 加入比色杯中 空白 标准 样品 标准 - 30μl - 样品 - - 30μl 1缓冲液/酶/底物 1000μl 1000μl 1000μl
37℃或30℃混合孵育5分钟，然后加入 2酶/稀释液 400μl 400μl 400μl 充分混合于37℃或30℃孵育2分钟，读取吸光值 （A1），再孵育2分钟后读取吸光值A2。 ΔA样品或标准=A2-A1
计算 1.本方法应使用附带的钾标准来校正。 2.以吸光值对相对应的标准值作图制定标准曲线。 3.样品的钾浓度可根据样品的吸光度值从标准曲线上 查出。
参考范围 3.5-5.1mmol/L(13.7-19.9mg/dl) 建议各实验室建立自己的正常参考范围。
校准 使用盒内附带的标准来校正。 如使用朗道复合校准血清CAL2351，第一点用蒸 馏水做1：1稀释的标准，第二点使用原浓度。 每天都应做校准。
质量控制 建议使用Randox的多项质控血清水平2和水平3 做每 天的质控。建议每天做质控，结果应该落在特定的范 围内。如果结果偏离范围，请按以下步骤查找原因： 1． 检查参数设置和光源是否正确。 2． 检查比色杯和吸样针是否洁净。 3． 检查水是否被污染，细菌增长会导致不正确的结果。 4． 检查反应温度。 5． 检查试剂盒的效期。
线性 钾浓度在2-10mmol/L(7.8-39.0mg/dl)时呈线性。
灵敏度 本方法可测得的血清中最小钾离子浓度为0.8mmol/L。
干扰性 胆红素≤665umol/L,Hb≤1g/L,TG≤24.2mmol/L不会对 该试验产生干扰。
精密度
批内（n=20）
样本 水平 1 水平 2 水平 3 平均值 mmol/l umol/l 3.4 4.5 7.1 SD 0.07 0.09 0.11 CV(%) 1.96 1.94 1.54
批间（n=20）
样本 水平 1 水平 2 水平 3 平均值 mmol/l umol/l 3.2 4.4 6.8 SD 0.08 0.15 0.23 CV(%) 2.4 3.4 3.4
相关性分析 采用本方法（Y）与另一个认可的方法（X）对77例浓 度范围从2.09-9.87mmol/L的样品分析结果线性回归 方程： Y=0.94X+0.20，r = 1.0
注意事项 1. 当钠和钾项目同时检测时请将钠放置在钾前面进 行检测。 2. 此试剂只用于体外诊断。不要用嘴吸。 3. 液体中含有叠氮钠，避免与皮肤和粘膜接触。如 果有所接触，请立即用大量的清水冲洗。如果与 眼睛接触，请立即去医院诊治。 4. 叠氮钠与铅、铜反应生成爆炸性的产物，请用大 量的水冲洗废液。 5. 冲洗管道和比色杯时用去离子水会使结果更加精
|
