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白细胞介素-6酶联免疫试剂盒使用说明书

                        IL-6   ELISA  KIT

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

白细胞介素-6Interleukin -6 , IL-6)主要是由巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生的一种糖蛋白,分子量为21-26KD。具有调节免疫应答、急性期反应及造血作用,并参与机体炎症反应和抗感染防御作用外,还与自身免疫疾病和某些肿瘤的发生和转归密切相关。椐文献报导在机体损伤、炎症、类风湿性关节炎、多发性骨髓瘤、系统性红斑狼疮、肝炎、烧伤及肾脏移植排斥反应等病人体液中IL-6水平有不同程度升高。

样品收集

取静脉血2ml ,注入试管中待凝固后,分离血清,-20℃保存2个月。测定前置室温或冷水中复融,混匀后,4℃ 3000rpm/ min离心5 min,取上清测定。

药盒组成

1)        酶标试剂HRP 1 瓶。

2)        IL-6抗体1瓶。

3)        IL-6标准品6瓶,浓度0501502505001000 pg/ml

4)        封闭液 1

5)        终止液 1瓶。

6)        96微孔板1

7)        显色液1瓶。

8)        包被液1

9)        洗涤液

10)     说明书

11)     封板膜

12)     密封袋

操作方法:

1)        标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):

2)        每孔加入抗体100ul包被2小时

3)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

4)        每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟

5)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

6)        每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀

7)        每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟

8)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

9)        每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟

10)     每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11)     测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行

注意事项

1.    2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.    各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3.    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数

4.    严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5.    为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6.    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.    底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

a)         不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

b)   标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实

本试剂盒主要技术参数

标准范围:0-1000 pg/ml

灵敏度:<3pg/ml

精密度:批内CV<4.5 %, 批间CV <8%

平均回收率 97.3%


规格:    96T/

 

保存:    2-8

有效期:  6个月(2-8℃)。

批号:20200310

 

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