T淋巴细胞转化率试验LBT HY-N0055 一、 实验原理
T淋巴细胞在体外培养时，受到PHA(植物血凝素)的刺激，发生活化增殖，其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高，四甲基噻唑蓝（MTT）作为底物参与反应，被催化形成蓝紫色结晶甲臢（fomazan） ,经盐酸-异丙醇溶解后为蓝色溶液。甲臢的形成量与细胞增殖活化的程度呈正相关。 二、 操作步骤
1、取抗凝血3毫升，500转/分离心10分钟，小心取中层（血浆与红细胞之间的白色膜） 2、用加HanK’S液2毫升，3500转/分.离心10分钟，去上清。洗涤2次。 3、用含10%小牛血清的PRMI 1640培养液稀释细胞，用血球仪计数白细胞，使其密度为1*107个/毫升的白细胞悬液。 4、在96孔培养板中，加入100微升细胞悬液，100微升PHA（浓度5微克/100微升），对照孔加含10%小牛血清的PRMI1640培养液100微升。 5、混匀后置37度、5%CO2培养箱内培养48小时 6、将培养板1500转离心10分钟，弃上清，每孔加入10微升MTT （浓度为5mg/ml），混匀，继续培养4小时后，每孔加入100微升盐酸异丙醇，低速振荡10分钟。 6、充分溶解后，用酶联免疫检测仪,在570nm测量OD值。 三、计算结果 T淋巴细胞转化率=OD值（样品管）-OD值（对照管） 北京华英生物技术研究所 地址：北京市海淀区上地信息2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A 电 话：（010）88114651 传 真：（010）88112680 邮 编：100142 网址：www.sinoukbio.com E-Mail:sinouk@163.com
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