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免疫球蛋白D.E酶联免疫试剂盒说明书

IgD,IgE ELISA KIT

使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

B淋巴细胞在抗原刺激下转化为浆细胞,产生能与相应抗原发生特异性结合的抗体,称为免疫球蛋白。免疫球蛋白DIgD)在血清中含量很低,约占总Ig1%,且含量个体差异较大,可作为膜受体存在于B细胞表面。IgD的功能尚不是很清楚,有研究提出,IgD可能参与启动B细胞产生抗体,还可能与某些超敏反应有关,如抗胰岛素抗体、抗青霉素抗体、抗核抗体、抗“O”抗体、抗基底膜抗体以及类风湿关节炎、甲状腺炎、系统性红斑狼疮等自身免疫病中的自身抗体,有些属IgD

B淋巴细胞在抗原刺激下转化为浆细胞,产生能与相应抗原发生特异性结合的抗体,称为免疫球蛋白。免疫球蛋白EIgE)对嗜碱性粒细胞和肥大细胞具有高度亲和性,故又称为反应素或亲细胞抗体。IgE主要由呼吸道和消化道黏膜固有层的浆细胞产生,在正常人的血液中含量极低,约占血清总Ig0.002%IgEI型变态反应有关,过敏体质或超敏患者,血清中IgE明显高于正常人,故IgE在血清中含量过高,常提示遗传过敏体质或I型变态反应的存在。

药盒组成

1)        酶标试剂HRP 1 瓶。

2)        IgDIgE抗体各1瓶。

3)        IgDIgE标准品6瓶浓度为510204080160 pg/ml

4)        封闭液 1       

5)        终止液 1瓶。

6)        96微孔板1

7)        显色液1瓶。

8)        包被液1

9)        洗涤液    用时20倍稀释

10)     说明书

11)     封板膜

12)     密封袋

 操作方法:

1)        标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管用1毫升包被液倍比稀释)

2)        每孔加入抗体100ul包被2小时

3)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

4)        每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟

5)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

6)        每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀

7)        每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟

8)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

9)        每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟

10)     每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11)     测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

注意事项

1.    2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.    各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3.    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数

4.    严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5.    为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6.    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.    底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

a)         不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

b)   标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实

本试剂盒主要技术参数

    标准范围:0-160pg/ml

    灵敏度: <0.5pg/ml

精密度:批间变异系数CVw8.3% ,批内变异系数CVw4.2%

        平均回收率:95.6%

正常参考值:血清IgE含量正常参考值:<100IU/ml

            血清IgD含量正常参考值:<200IU/ml

规格:    96T/

保存:    2-8

有效期:  6个月(2-8℃)。

批号:  20200110

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