免疫球蛋白D.E酶联免疫试剂盒说明书
IgD,IgE ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
B淋巴细胞在抗原刺激下转化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的抗体，称为免疫球蛋白。免疫球蛋白D（IgD）在血清中含量很低，约占总Ig的1%，且含量个体差异较大，可作为膜受体存在于B细胞表面。IgD的功能尚不是很清楚，有研究提出，IgD可能参与启动B细胞产生抗体，还可能与某些超敏反应有关，如抗胰岛素抗体、抗青霉素抗体、抗核抗体、抗“O”抗体、抗基底膜抗体以及类风湿关节炎、甲状腺炎、系统性红斑狼疮等自身免疫病中的自身抗体，有些属IgD。
B淋巴细胞在抗原刺激下转化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的抗体，称为免疫球蛋白。免疫球蛋白E（IgE）对嗜碱性粒细胞和肥大细胞具有高度亲和性，故又称为反应素或亲细胞抗体。IgE主要由呼吸道和消化道黏膜固有层的浆细胞产生，在正常人的血液中含量极低，约占血清总Ig的0.002%。IgE与I型变态反应有关，过敏体质或超敏患者，血清中IgE明显高于正常人，故IgE在血清中含量过高，常提示遗传过敏体质或I型变态反应的存在。
药盒组成：
1) 酶标试剂HRP 1 瓶。
2) IgD，IgE抗体各1瓶。
3) IgD，IgE标准品6瓶浓度为5、10、20、40、80、160 pg/ml。
4) 封闭液 1瓶
5) 终止液 1瓶。
6) 96微孔板1块
7) 显色液1瓶。
8) 包被液1瓶
9) 洗涤液 用时20倍稀释
10) 说明书
11) 封板膜
12) 密封袋
操作方法：
1) 标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管用1毫升包被液倍比稀释）
2) 每孔加入抗体100ul包被2小时
3) 弃去液体，甩干，每孔加稀释后洗涤液300ul，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
4) 每孔加入封闭液200ul，轻轻晃动混匀，室温静置30分钟
5) 弃去液体，甩干，每孔加稀释后洗涤液300ul，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
6) 每孔加入包被液25微升，标本25微升，标准品50ul轻轻晃动混匀
7) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀，室温静置60分钟
8) 弃去液体，甩干，每孔加稀释后洗涤液300ul，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
9) 每孔加入显色液100ul，轻轻晃动混匀，显色15分钟
10) 每孔加入终止液100UL终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11) 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3． 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数
4． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内，震荡30秒。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a) 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
b) 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实
本试剂盒主要技术参数：
标准范围：0-160pg/ml
灵敏度： <0.5pg/ml
精密度：批间变异系数CVw〈8.3% ，批内变异系数CVw〈4.2%
平均回收率：95.6%
正常参考值：血清IgE含量正常参考值：<100IU/ml。
血清IgD含量正常参考值：<200IU/ml
规格： 96T/盒
保存： 2-8℃
有效期： 6个月（2-8℃）。
批号： 20200110
地址：北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
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