环氧合酶2酶联免疫试剂盒使用说明书
COX-2 (HY-L10010) ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
环氧合酶2(Cycloxygenase,COX2),又名前列腺素过氧化物合成酶,是花生四烯酸代谢的关键限速酶。COX有2个同分异构体,即结构型(COX-1)和诱生型(COX-2)。人类COX-2基因位于染色体1q25.2-25.3上,含有10个外显子和9个内含子,其mRNA表达产物为4.5KB的蛋白质。正常情况下,COX-2基因不表达。但COX-2在有丝分裂原刺激下可大量表达,COX-2主要分布于核膜。近年研究表明,COX-2除参与炎症反应外,其过度表达与多种上皮性肿瘤发生发展关系密切,并可作为预防和治疗肿瘤的靶分子,因而具有重要的临床意义。
样品收集:
取静脉血2ml ,注入试管中,分离血清,-20℃保存2个月。
药盒组成:
1) 酶标试剂HRP 1 瓶。
2) COX-2抗体1瓶。
3) COX-2标准品6瓶,浓度0、5、10、20、40、80 U/L
4) 封闭液 1瓶
5) 终止液 1瓶。
6) 96微孔板1块
7) 显色液1瓶。
8) 包被液1瓶
9) 洗涤液
10) 说明书
11) 封板膜
12) 密封袋
操作方法:
1) 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):
2) 每孔加入抗体100ul包被2小时
3) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
4) 每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟
5) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
6) 每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀
7) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
8) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
9) 每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟
10) 每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11) 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数
4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a) 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
b) 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实
本试剂盒主要技术参数:
标准范围:0-80 U/L
灵敏度:<1 U/L
精密度:批内CV<4.5 %, 批间CV <8%
平均回收率 97.3%
规格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6个月(2-8℃)。
批号:
地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
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