肾损伤因子1酶联免疫试剂盒使用说明书                 

            KIM1  (HY-G0007)  ELISA  KIT

使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

肾损伤因子1（kidney injury molecule-1,KIM1）主要表达于肾小管上皮细胞表面的I型膜蛋白，分子量为104KDA，KIM1的细胞外可溶性部分包括6个半胱氨酸免疫球蛋白结构域以及含有丰富苏氨酸-丝氨酸-脯氨酸的蛋白结构域，这些蛋白结构域含有丰富的糖基化蛋白。KIM1在正常肾脏中低表达，肾损伤后，KIM1的胞外片段可迅速裂解并进入尿中，是敏感、特异性的肾小管组织损伤标志物。

标本收集：空腹抽静脉血2ml离心取血清，-20℃保存三个月。

药盒组成：

1)        KIM1酶标抗原HRP 1 瓶。

2)        KIM1抗体1瓶。

3)        KIM1标准品6瓶，浓度为0、10、20、40、80、160pg/ml       

4)        终止液 1瓶。

5)        96微孔板1块

6)        显色液1瓶。

7)        包被液1瓶

8)        洗涤液   

9)        说明书

10)     封板膜

11)     密封袋

 操作方法：

1)        标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：

2)        每孔加入抗体100ul包被2小时

3)        弃去液体，甩干，每孔加稀释后洗涤液300ul，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

4)        每孔加入封闭液200ul，轻轻晃动混匀，室温静置30分钟

5)        弃去液体，甩干，每孔加稀释后洗涤液300ul，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

6)        每孔加入包被液25微升，标本25微升，标准品50ul轻轻晃动混匀

7)        每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀，室温静置60分钟

8)        弃去液体，甩干，每孔加稀释后洗涤液300ul，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

9)        每孔加入显色液100ul，轻轻晃动混匀，显色15分钟

10)     每孔加入终止液100UL终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11)     测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

注意事项

1．    从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．    各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差

3．    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数

4．    严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5．    为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7．    底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内，震荡30秒。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

a)         不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

b)   标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行检测。

本试剂盒主要技术参数：

    标准范围：0-160pg/ml

    灵敏度： <1pg/ml 。

    正常参考值：41±15 pg/ml(X±SD)

规格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6个月（2-8℃）。

批号：20200513

地址：北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A

北京华英生物技术研究所

邮编：100085

电话：010-88114651

传真：010-88112680

免费电话：8008109828