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肾损伤因子1酶联免疫试剂盒使用说明书                 

            KIM1  (HY-G0007)  ELISA  KIT

使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

肾损伤因子1kidney injury molecule-1,KIM1)主要表达于肾小管上皮细胞表面的I型膜蛋白,分子量为104KDAKIM1的细胞外可溶性部分包括6个半胱氨酸免疫球蛋白结构域以及含有丰富苏氨酸-丝氨酸-脯氨酸的蛋白结构域,这些蛋白结构域含有丰富的糖基化蛋白。KIM1在正常肾脏中低表达,肾损伤后,KIM1的胞外片段可迅速裂解并进入尿中,是敏感、特异性的肾小管组织损伤标志物。

 

标本收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。

药盒组成

1)        KIM1酶标抗原HRP 1 瓶。

2)        KIM1抗体1瓶。

3)        KIM1标准品6瓶,浓度为010204080160pg/ml       

4)        终止液 1瓶。

5)        96微孔板1

6)        显色液1瓶。

7)        包被液1

8)        洗涤液   

9)        说明书

10)     封板膜

11)     密封袋

 操作方法:

1)        标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):

2)        每孔加入抗体100ul包被2小时

3)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

4)        每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟

5)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

6)        每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀

7)        每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟

8)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

9)        每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟

10)     每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11)     测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

 

注意事项

1.    2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.    各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3.    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数

4.    严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5.    为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6.    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.    底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

a)         不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

b)   标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行检测。

本试剂盒主要技术参数

    标准范围:0-160pg/ml

    灵敏度: <1pg/ml

    正常参考值:41±15 pg/ml(X±SD)

规格:    96T/

保存:    2-8

有效期:  6个月(2-8℃)。

批号:20200513

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