科研药盒，慎用于临床
蛋白质羰基试剂盒说明书
(HY-M0088)KIT
蛋白质羰基化是指氨基酸残基侧链中的氨基或亚氨基受到氧自由基攻击最后转变成醛基,并释放NH3+的过程。其在体内的形成主要是通过金属离子催化氧化系统完成。在这个过程中，二价铁离子与蛋白质上的氨基酸残基形成铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物。H202作用于此配位复合物的铁(Ⅱ)上，产生·OH、OH- 和铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物。·OH从侧链氨基酸上提出一个氢原子，使侧链氨基酸上的碳上有一个不配对电子。在此不配对电子作用下，铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物又重新变回铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物，随后配位键断开，二价铁离子和NH3+与复合物分离，由此在蛋白质侧链形成羰基或羰基衍生物。蛋白质中的赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸残基都有可能参与羰基化。
测定原理：
羰基与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙，在 370nm 处有特征吸收峰。
试剂盒组成：
试剂1：硫酸链霉素溶液 1 瓶
试剂2： 反应液(内含DNPH) 1瓶
试剂3： 基质液 1瓶
试剂4： 基质液 1瓶
试剂5： 反应液 1瓶
操作步骤
血清：50微升 组织：100或200微升 质控、正常值：50微升
蛋白质羰基操作步骤 单位（ul）
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对照管 标准管 样本
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标准管 —— 50 ——
样本 —— —— 300
试剂1 50 50 50
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室温 混匀 10分钟 3500转 离心 5分钟取上清液200微升
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试剂2 400 400 400
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室温置于暗处放置1小时 中间3500转离心5分钟 反应完毕后
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试剂3 500 500 500
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加入试剂3溶解沉淀 3500转离心5分钟，去上清，留沉淀
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试剂4 500 500 500
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4度 3500转 离心10分钟 去上清 留沉淀
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试剂4 500 500 500
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4度 3500转 离心10分钟 去上清 留沉淀
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试剂4 500 500 500
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4度 3500转 离心10分钟 去上清 留沉淀
试剂5 500 500 500
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等沉淀全部溶解 37度 水浴 15分钟 3500转离心5分钟，取上清
终点法 波长3700nm 蒸馏水调零
四、计算结果
适用于分光光度计：将标准品用缓冲液（R1）进行倍比稀释后的单位浓度为横坐标，以对应管的吸光度OD值为纵坐标作图，待测管OD值在曲线上查出对应的浓度值。
全自动或半自动生化仪直接读取数据) 如果定标扩大10倍，结果除以10
五、正常参考值：
各实验室应建立自己的正常值
正常参考值仅供参考：大鼠肺组织2.44nmol/mg protein
六、注意事项：
1. 样品测定值超过上限，用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
2. 本法以定值血清为标准，准确性高。
3. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠，应避免直接接触皮 肤和眼睛，切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
本试剂盒主要技术指标：
1、线性范围：0-25U/ml
2、精密度：批内变异系数：CVw<7.3%；
批间变异系数：CVw < 10%
3、灵敏度：<0.1nmol/ml
有效日期：6个月
生产批号：20200513
地址：北京市海淀区信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
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