猪瘟病毒抗体酶联免疫试剂盒使用说明书

   CSFV （HY-N0109）ELISA KIT

使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

猪瘟病毒（CSFV）是目前危害国内养猪业一种高发病率、高死亡率和高度接触传染的病毒。在猪的免疫预防工作中,最值得关注的就是强化免疫的接种时机问题。在过高的抗体水平进行免疫,过高的抗体水平还会中和疫苗,影响疫苗的免疫效果,导致免疫失败；在较低的抗体水平进行免疫,又会出现抗体保护真空期,威胁猪的健康。该试剂盒检测反映抗体水平，利于指导免疫时机。

测定原理： 如果待检样品中含有猪瘟病毒抗体，就会与包被板上的猪瘟病毒重组抗原及第二步加入的抗猪二抗酶标结合物特异性结合。间接结合在包被板上的抗猪二抗酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有保护水平的 CSFV 抗体

试剂盒组成：

1.    预包被板 48T/96T；

2.    酶结合物（1号液）1支；

3.    浓缩洗涤液（2号液）1支；

4.    底物（3号液）1支；

5.    显色剂（4号液）1支；

6.    样本稀释液（5号液）1支；

7.  终止液（6号液）1支；

8.  阳性对照品 1支；

9.  阴性对照品 1支；

10. 不干胶膜 1/2片；

11. 自封袋 1个；
12. 使用说明书 1份；

操作步骤：

1.洗涤液配制用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释，如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。
2.样本稀释用样本稀释液（5号液）将待检血清样本按1：100稀释，如取5ul样本与495ul样本稀释液，混匀。阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。
3.加样反应每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100ul）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100ul，37℃避光反应30分钟

4.甩去孔内液体，每孔注满工作洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟后再甩净，拍干。
5.加酶反应，除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1号液）100ul。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。
6.显色反应加底物液（3号液）和显色剂（4号液）各100ul，混匀，37℃避光显色10分钟。7.加终止液（6号液）50ul，终止反应（加终止液后，蓝色会变为黄色），用酶标仪于450nm波长，读取OD值。

注意事项

1．    从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．    各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差

3．    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数

4．    严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5．    为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7．    底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

参考值：

1、  Cut-off值(COV)=阴性对照平均OD值*2.1(阴性对照孔OD值＜0.08，按0.08计）

2、阴性对照孔OD值≤0.2（若＞0.2，则实验无效）

阳性对照孔OD值≥0.5（若＞0.5，则实验无效）

 检验结果解释：

   样品OD值≥COV,则判为猪瘟病毒抗体为阳性

   样品OD值≤COV,则判为猪瘟病毒抗体为阴性

规格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6个月（2-8℃）。

批号：  20200110

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