科研药盒，慎用于临床
乙酰胆碱转移酶试剂盒操作说明书
ChAT （HY-M0050）KIT
乙酰胆碱转移酶（Choline acetyltransferase,ChAT）和乙酰胆碱脂酶分别是Ach的合成 酶和水解酶，调节Ach的代谢。食道组织中这两个酶的活力代表了食管内源性胆碱能神经功能状态。乙酰胆碱是延髓脊运动神经元，自主神经系统神经节前纤维， 神经节后胆碱能纤维，以及中枢神经系统内许多神经元的主要神经递质。它是通过胆碱乙酰转移酶的作用，由胆碱与来处线粒体的乙酰辅酶A所合成。在获得释放 后，乙酰胆碱刺激特殊的胆碱能受体，这种相互作用很快被局部的胆碱酯酶所终止，后者使乙酰胆碱被除数水解为胆碱与乙酸盐。乙酰胆碱的水平由胆碱乙酰转移酶 和胆碱的摄取所控制。
检测原理：
以乙酰辅酶A和胆碱为底物，在ChAT的作用下，反应的生成物与显色剂结合，在324nm处测定其吸光度，以此计算ChAT活性。
试剂组成：
试剂1（R1）：液体 1瓶 试剂2（R2）：液体 1瓶
试剂3（R3）：液体 1瓶 试剂4（R4）：液体 1瓶
试剂5（R5）：液体 1瓶 试剂6（R6）：液体 1瓶
试剂7（R7）：液体 1瓶 试剂8（R8）：标准品 1瓶
操作步骤
ChAT 操作步骤 （单位ul）
—————————————————————————————————
对照管 标准品管 样本
—————————————————————————————————
试剂1 52.5 52.5 52.5
试剂2 2.5 2.5 2.5
试剂3 5 5 5
试剂4 5 5 5
试剂5 5 5 5
试剂6 5 5 5
—————————————————————————————————
充分混匀，37℃水浴5分钟
—————————————————————————————————
样本 —— —— 10
标准品 —— 10 ——
—————————————————————————————————
充分混匀，37℃水浴20分钟，100℃水浴2分钟终止反应
—————————————————————————————————
蒸馏水 425 425 425
——————————————————————————————————————
充分混匀，离心3500转离心10分钟，取上清液
—————————————————————————————————
上清液 450 450 450
试剂7 10 10 10
—————————————————————————————————
充分混匀，静置15分钟，324nm处，读取各管吸光度
计算结果：
以标准品浓度为横坐标，OD为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度。
ChAT活力（U/ml）=（测定OD值-对照OD值）÷反应时间（20分钟）÷【（消光摩尔系数（1.98×10-5）×比色光径（1cm）×1000）】×【反应总体积（510ul）÷取样量（10ul）】
注意事项：
1. 样品测定值超过上限，用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
2. 本法以定值血清为标准，准确性高。
3. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠，应避免直接接触皮 肤和眼睛，切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于9%和11%
生产批号：20200325
有效期：6个月
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区12层12A
北京华英生物技术研究所
邮编：100085
电话：010-88114651
传真：010-88112680
免费电话：8008109828
