科研药盒，慎用于临床 不可溶性NSP试剂盒说明书 INSP（HY-NE271） 非淀粉多糖（non-starch polysaccharides，NSP）是由若干单糖通过糖苷键连接成的多聚体，包括除α-葡聚糖以外的大部分多糖分子。NSP最初是根据提取和分离多糖所采用的方法进行分类的，分为可溶性非淀粉多糖（soluble non-starch polysaccharides，SNSP）和不可溶性非淀粉多糖（insoluble non-starch polysaccharides，INSP），非淀粉多糖(NSP)是饲料纤维的主要成分，这些纤维将饲料营养物质包围在细胞壁里面，部分纤维可溶解于水并产生粘性物质。 测定原理： 利用糖醇衍生化成乙酸酶的方法，用石英毛细血管色谱柱对样品进行分析测定，根据色谱图，计算样品中可溶性NSP各组成单糖的含量及总含量。 实验方法 1、 样品前处理 A、称取大约0.25克样本，均质仪粉碎 B、加入0.25克白石英砂，均质仪粉碎 C、加入40毫升丙酮，混合15分钟，3500转离心10分钟，去除上清液。通风橱中磁力搅拌，处理后放置干燥。 D、加入2毫升DMSO，充分混匀，反复3次 E、在沸水中水浴30分钟 F、加入乙酸盐缓冲液，充分混匀 G、加入α耐高温淀粉酶，充分混匀。 H、100℃水浴1小时，水浴过程中进行混匀，至少3次 I、加入糖化酶，充分混匀 J、60℃，水浴2小时，过程中不断混匀，3500转离心5分钟取留沉淀 2、测定 取沉淀，加入6mol/L硫酸35℃水解不可溶性NSP样品1小时，再加入0.5mol/L硫酸100℃水解2小时。使样品全部水解，冷却至室温，加入0.1毫升内标酶，并在混合液中加入0.2毫升无水乙醇和1滴NH4OH，再加入新配制的NaBH4，放置40℃水浴，加入冰醋酸分解过量的NaBH4。加入0.5毫升1-甲基咪唑和5毫升乙酸酐反应10分钟，然后加入1毫升无水乙醇静置10分钟，分两次加入10毫升KOH，溶液分两层，用少量乙酸乙酯提取有机层2～3次合并，有机层用氮气吹干，所得糖醇乙酸酯直接进行气相色谱分析。 气相色谱条件： 岛津OV-1701石英毛细血管，规格为25m×0.3mm，起始柱温195℃，升温速度8℃/min，最后恒温度升至225℃，检测器温度250℃，汽化室温度210℃，分流比为1:20，载气N2，进样量0.8微升。 结果计算 计算公式：[(AT×W1×1000×RF)÷(A1×WT)] ×0.89 AT为样品峰面积 A1为内标物峰面积 W1为内标物重量（mg） WT为样品重量（mg） RF为响应因子（F1/FT） 0.89为聚合因子 地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A 北京华英生物技术研究所 邮编：100085 电话：010-88114651 传真：010-88112680 免费电话：8008109828
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