科研药盒，慎用于临床
乙酰胆碱酯酶试剂盒操作说明书
A-CHE （HY-M0051）KIT
乙酰胆碱酯酶即真性胆碱脂酶主要来自胎儿的兴奋性细胞，反应神经系统成熟度。胎儿神经管闭合缺损（如开放性脊柱裂）及开放性腹壁缺陷时，羊水中假性胆碱酯酶增加（PchE）。两者可通过同时测定羊水中PCHE活性并算出羊水ACHE/PchE比值来区分，具有很高的科研意义。
检测原理：
乙酰胆碱酯酶（Acetylcholineesterase）水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB（对称三硝基苯，Sym-Trinitrobenzene）黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶的活力。
试剂组成：
试剂一：标准品，粉剂×3支，4℃保存6个月。
1mol/ml标准品应用液配制：取标准品一支加生理盐水10ml混匀，现用现配。
试剂二：底物，粉剂×2支，4℃保存6个月。
底物缓冲液配制：用时每支粉剂加生理盐水20ml，制备成底物缓冲液，4℃保存两周。
试剂三：显色剂贮备液，3ml×1支，4℃保存6个月。
显色应用液配制：用时按照显色剂贮备液：生理盐水=1︰9稀释，配成显色应用液。
按需配制，也可一次配制30ml，避光冷藏3个月。
试剂四：抑制剂，液体2ml×1支。打开后装在空的小塑料瓶内（附空瓶一只），室温保存6
个月。
试剂五：透明剂，液体6ml×1支，室温保存6个月。天冷时会有沉淀或混浊，须在37℃水
浴加热至透明后方可使用。
生理盐水：60ml×2瓶，室温保存6个月。
样本前处理：
组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的
生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清
液待测（同时取部分上清测定蛋白浓度，蛋白定量试剂盒本所有售）。
血清（浆）：取不抗凝或抗凝全血1000～1500转/分，离心8分钟，取上层血清（浆）。
一般测定时将血清或血浆用生理盐水1︰9稀释（具体稀释浓度以预实验结果为准）。
全血样本：取0.1ml抗凝全血加双蒸水至10ml，即按1︰99稀释，充分混匀。如果您的
样本量很少，可以减少取样量。例如取0.01ml或0.02ml抗凝全血加双蒸水
至1ml或2ml。取aml（一般为0.1ml）进行检测，每个样本取样前必须充
分混匀。
操作步骤：
———————————————————————————————————— 测定管 对照管 标准管 空白管——————————————————————————--------------------
样本（ml） a* —— —— —— 1umol/ml 标准品应用液（ml） —— —— a* ——
双蒸水 （ml） —— —— —— a*
底物缓冲液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5
显色应用液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5————————————————————————————————————
混匀，37°C准确反应6分钟
————————————————————————————————————抑制剂（ml） 0.03 0.03 0.03 0.03透明剂（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1
样本（ml） —— a* —— ——
————————————————————————————————————
混匀，静置15分钟，波长412nm，0.5cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度OD值。
注：a*所表示所取的样品量、标准品量、双蒸水的量,三者均相等：
①、血清（浆）测试前用生理盐水10倍稀释，参考取样量为30～50l。
②、10%脑组织匀浆的参考取样量为30～50l。
③、1:99稀释后的全血稀释液取0.1ml，取样前每只要摇匀。
计算结果：
单位定义：每毫克组织蛋白在37ºC保温6分钟，水解反应体系中1mol基质为1个活力
单位。
ChAT活力 = 测定OD值-对照OD值 x反应总体积（600ul）÷5%匀浆液浓度
（U/g组织湿重） 反应时间（20分钟）x 1.98 x 10-2 取样量（25ul） (g组织湿重/ml)
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%
生产批号：20200325
有效期：6个月
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区12层12A
北京华英生物技术研究所
邮编：100085
电话：010-88114651
传真：010-88112680
免费电话：8008109828
