科研药盒，慎用于临床
丁酰胆碱酯酶试剂盒操作说明书
B-CHE （HY-M0052）KIT
丁酰胆碱脂酶又拟称胆碱酯酶、假性胆碱酯酶和血清胆碱酯酶。它是由肝脏细胞合成分泌进入血液的，主要分布在肝脏、血清和淋巴液中。丁酰胆碱脂酶蛋白为四聚体，四个亚基的结构完全一样，各包括574个氨基酸，每个亚基还结合9条糖链，占亚基相对分子质量的23.9%。丁酰胆碱脂酶属于B酯酶，在有机磷的解毒中发挥了重要作用，通过和有机磷结合，减少了血中可和丁酰胆碱脂酶结合的游离的有机磷，从而减轻丁酰胆碱堆积造成的中毒症状，起到了间接的解毒作用
检测原理：
丁酰胆碱酯酶水解丁酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可以反应胆碱酯酶的活力。
试剂组成：
试剂一：标准品，粉剂×3支，4℃保存。
1μmol/ml标准品应用液的配制：取标准品一支加生理盐水10ml混匀，现用现配。
试剂二：底物粉剂×2支，用时每支粉剂加生理盐水20ml，现用现配，配好后4℃保存两周。
试剂三：显色剂贮备液，3ml×1支，4℃保存，用时以生理盐水1︰9稀释，配成显色应
用液。需多少配多少，也可以一次配成30ml，避光冷藏。保存期3个月。
试剂四：抑制剂，液体×1支。打开后可以装在空的小塑料瓶内（附空瓶一只），室温保存。
试剂五：透明剂，液体6ml×1支。室温保存。
生理盐水：60ml×2瓶，室温保存。
样本前处理：
组织样本:准确称取组织重量,按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例,加入9倍体积的生理盐水，
冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清，即为10%匀浆上
清液;
血清样本：取抗凝全血1000～1500转/分钟，离心10分钟，取上层血浆。也可测血清，
测时将血清(浆)用生理盐水1︰19稀释；
全血样本：取0.1ml抗凝全血加生理盐水至10ml按1︰99稀释，取aml(一般取0.1ml)
检测，每个样本取样前必须充分混匀。
操作步骤：———————————————————————————————————— 测定管 对照管 标准管 空白管————————————————————————————————————样本（ml） a* —— —— ——1umol/ml 标准品应用液（ml）—— —— a* ——
双蒸水 （ml） —— —— —— a*
底物缓冲液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5
显色应用液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5————————————————————————————————————
混匀，37°C准确反应6分钟
————————————————————————————————————抑制剂（ml） 0.03 0.03 0.03 0.03
透明剂（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1
样本（ml） —— a* —— ——
————————————————————————————————————
混匀，静置15分钟，波长412nm，0.5cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度OD值。
注：a*所表示所取的样品量、标准品量、双蒸水的量,三者均相等：
①、血清（浆）测试前用生理盐水10倍稀释，参考取样量为30～50l。
②、10%脑组织匀浆的参考取样量为30～50l。
③、1:99稀释后的全血稀释液取0.1ml，取样前每只要摇匀。
计算结果：
单位定义：每毫克组织蛋白在37ºC保温6分钟，水解反应体系中1umol基质为1个单位。
B-CHE活力 = 测定OD值-对照OD值 x 标准品浓度 ÷ 待测样本蛋白浓度
标准OD值-空白OD值
（U/mgprot） (1umol/ml) （mgprot/ml）
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%
生产批号：20200325
有效期：6个月
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区12层12A
北京华英生物技术研究所
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