科研药盒，慎用于临床
氢-钾ATP酶试剂盒操作说明书
H+K+ - ATP （HY-M0030）KIT
H+、K+－ATPase对胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意义。70年代Forte等人首先在牛蛙胃粘膜上分离出一类能被K＋专一激活而不 被乌本苷抑制的ATPase，即H+、K+－ATPase。随后Lee·J等人又证明了含有该酶的膜囊泡运动跨膜运输质子的作用，从而为胃酸分泌的机理奠 定了分子学基础。H＋、K＋-ATPase定位于胃粘膜壁细胞上，属于第二类质子泵，它通过自身的磷酸化（E1→E2）与去磷酸化（E2→E1）完成的 H＋/K＋电中性跨膜离子转运，不断将壁细胞内的质子运输到膜外行使泌酸的功能。
检测原理：
ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
H＋K＋-ATP酶是一种能被钾专一激活而不被乌本苷抑制的ATP酶。
试剂组成：
试剂一 液体 10ml×2瓶 4℃保存
试剂二 液体 7ml×1瓶 4℃保存
试剂三 液体 8ml×1瓶 4℃保存
试剂四 粉剂 粉剂×2支 -20℃保存
试剂四的配制：用时每支试剂四粉剂加双蒸水至5ml，现用现配。（余下的-20℃以下可保存1周。）
试剂五 粉剂 粉剂×2支 4℃保存
试剂五的配制：用时每支试剂五加双蒸水至5ml，适当加热溶解，4℃保存。
试剂六 液体 3ml×1支 4℃保存
试剂七 液体 10ml×1支 4℃保存
试剂七的配制：用时每瓶试剂七加双蒸水至25ml，室温保存。
试剂八 粉剂 粉剂×3瓶 4℃保存
试剂八的配制：用时每瓶试剂八加双蒸水至40ml溶解，溶解后4℃可保存一周。
试剂九 粉剂 粉剂×1瓶 4℃保存
试剂九的配制：用时每瓶试剂九粉剂加双蒸水至100ml溶解，室温保存。
试剂十 液体 100ml×1瓶 室温保存
试剂十一 10mmol/L标准品贮备液 10ml×1瓶 4℃保存
0.5μmol/ml标准液的配制：用时将10mmol/L标准贮备液：
双蒸水=1:19的比例配制，即取0.5ml加双蒸水定容至10ml
定磷剂的配制：
按双蒸水：试剂十：试剂八：试剂九=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂无效，若蓝色则为磷污染，定磷剂需现用现配。
样本前处理：
组织样本:准确称取组织重量,按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例,加入9倍体积的生理盐水，
冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清，即为10%匀浆上
清液;
血清样本：取抗凝全血1000～1500转/分钟，离心10分钟，取上层血浆。也可测血清，
测时将血清(浆)用生理盐水1︰19稀释；
全血样本：取0.1ml抗凝全血加生理盐水至10ml按1︰99稀释，取aml(一般取0.1ml)
检测，每个样本取样前必须充分混匀。
操作步骤：
1、 酶促反应：
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对照管 测定管
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试剂一（ul） 130 130
试剂二（ul） 80
试剂三（ul） 120 ——
试剂四（ul） 40 40
试剂五（ul） 40 40
试剂六（ul） —— 40
样本（ul） —— 100
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混匀37℃水浴10分钟
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试剂七（ul） 50 50
样本（ul） 100 ——
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混匀3500转/分，离心10分钟，取上清400μl定磷。
2、 定磷：
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标准管 对照管 测定管
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0.5μmol/ml磷标准液（ul） 400 —— ——
对照管的上清液（ul） —— 400 ——
测定管的上清液（ul） —— —— 400
定磷剂（ul） 2000 2000 2000 —————————————————————————————————————————
混匀，45℃水浴5分钟，冷却至室温，660nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。
组织中ATPase的计算公式：
①、定义：规定每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1µmol无机磷的量为一个
ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时（µmolPi/mgprot/hour）。
②、公式：
H+K+ - ATPase活力= 测定OD值-对照OD值 x 标准品浓度 x 反应体系中样本稀释倍数x 60分钟/10分钟 ÷ 待测样本蛋白浓度
标准OD值
（U/mgprot） (0.5umol/ml) (4.8) （mgprot/ml）
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%
生产批号：20200320
有效期：6个月
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区12层12A
北京华英生物技术研究所
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