科研药盒，慎用于临床
铜-ATP酶试剂盒操作说明书
Cu2+ - ATP （HY-M0031）KIT
ATP酶存在于细胞膜及细胞器膜上，在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用，机体在缺O2及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变。另外有些遗传疾病也与此酶活力的高低有关。
检测原理：
ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。Cu2+-ATPase酶是一种能被钾激活而可被钒酸抑制的酶。
试剂组成：
试剂一 液体 10ml×2瓶 4℃保存6个月
试剂二 液体 10ml×1瓶 4℃保存6个月
试剂三 液体 7ml×1瓶 4℃保存6个月
试剂四 粉剂 粉剂×3支 4℃保存6个月
试剂四的配制：
用时每支加双蒸水至5ml充分溶解，余下的-20℃以下可保存一周（不可反复冻融）
试剂五 粉剂 粉剂×1支 4℃保存6个月
试剂五的配制：用时每支加双蒸水至5ml可适当加热充分溶解
试剂六 粉剂 粉剂×1支 4℃保存6个月
溶剂 3ml×1瓶 4℃保存6个月
试剂六的配制：用时将一支粉剂倒入3ml溶剂中，充分溶解
试剂七 液体 10ml×1瓶 室温保存1年
试剂八 粉剂 粉剂×3支 4℃保存6个月
试剂八的配制：用时一支加双蒸水至40ml溶解，溶解后4℃可保存一周。
试剂九 粉剂 粉剂×1瓶 4℃保存6个月
试剂十 2.5mmol/L 硫酸 100ml×1瓶 室温保存6个月
试剂十一 10mmol/L标准磷贮备液 10ml×1瓶 4℃保存6个月
0.5μmol/ml标准液的配制：用时将10mmol/L标准贮备液：
双蒸水=1:19的比例配制，即取0.5ml加双蒸水定容至10ml
定磷剂的配制：
按双蒸水：试剂十：试剂八：试剂九=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂无效，若蓝色则为磷污染，定磷剂需现用现配。
样本前处理：
组织样本:准确称取组织重量,按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例,加入9倍体积的生理盐水，
冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清，即为10%匀浆上清液;
血清样本：取抗凝全血1000～1500转/分钟，离心10分钟，取上层血浆。也可测血清，
测时将血清(浆)用生理盐水1︰19稀释；
全血样本：取0.1ml抗凝全血加生理盐水至10ml按1︰99稀释，取aml(一般取0.1ml)
检测，每个样本取样前必须充分混匀。
操作步骤：
1、 酶促反应：
—————————————————————————————————————————
对照管 测定管
—————————————————————————————————————————
试剂一（ul） 130 130
试剂二（ul） —— 80
试剂三（ul） 120 ——
试剂四（ul） 40 40
试剂五（ul） 40 40
试剂六（ul） —— 40
样本（ul） —— 100
—————————————————————————————————————————
混匀，37℃准确反应10分钟
—————————————————————————————————————————
试剂七（ul） 50 50
样本（ul） 100 ——
—————————————————————————————————————————
混匀3500转/分，离心10分钟，取上清400μl定磷
2、 定磷：
—————————————————————————————————————————
标准管 对照管 测定管
—————————————————————————————————————————
0.5μmol/ml磷标准液（ul） 400 —— ——
上清液（ul） —— 400 400
定磷剂（ul） 2000 2000 2000
—————————————————————————————————————————
混匀，45℃水浴5分钟，冷却至室温，660nm处，1cm光径，双蒸水调零，比色
组织中ATPase的计算公式：
①、定义：规定每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1µmol无机磷的量为一个
ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时（µmolPi/mgprot/hour）。
②、公式：
Cu2+- ATPase活力= 测定OD值-对照OD值 x 标准品浓度 x 反应体系中样本稀释倍数x 6* ÷ 待测样本蛋白浓度
标准OD值
（U/mgprot） (0.5umol/ml) （mgprot/ml）
注：*反应时间为10分钟，酶活力定义为1小时，故乘以6
**稀释倍数=130+80+40+40+40+100+50 = 4.8倍
100
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%
生产批号：20200410
有效期：6个月
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区12层12A
北京华英生物技术研究所
邮编：100085
电话：010-88114651
传真：010-88112680
免费电话：8008109828
