科研药盒，慎用于临床
蔗糖合成酶试剂盒操作说明书
SS（HY-M0039）KIT
蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（SucroseSynthase,EC
2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。
检测原理：
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水杨酸法测定还原糖的含量
来反映酶活性的高低。
试剂组成：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前每支加入1.2mL试剂二充分溶解待用，现配现用；
试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL
提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）： —————————————————————————————————————————
试剂名称（ul） 测定管 对照管 —————————————————————————————————————————
样本 10 10
试剂三 40 ——
试剂一 40
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混匀，30℃准确水浴30min后，95℃水浴10min
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试剂四 50 50
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95℃水浴5min左右，冷却至室温
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蒸馏水 400 400
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混匀，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下测定各管吸光值。△A=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。
SS-Ⅰ活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y=0.0012x-0.0492；x为标准品浓度（μg/mL），y为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg/min/mgprot)=(ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=138.9×(ΔA+0.0492)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg/min/g鲜重)=(ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=138.9×(ΔA+0.0492)÷W
V反总：反应体系总体积，0.05mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液
体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y=0.0006x-0.0492；x为标准品浓度（μg/mL），y为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg/min/mgprot)=(ΔA+0.0492)÷0.0006×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=277.8×(ΔA+0.0492)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg/min/g鲜重)=(ΔA+0.0492)÷0.0006×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=277.8×(ΔA+0.0492)÷W
V反总：反应体系总体积，0.05mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液
体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
1. 样品测定值超过上限，用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
2. 本法以定值血清为标准，准确性高。
3. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠，应避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%
生产批号：20200210
有效期：6个月
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区12层12A
北京华英生物技术研究所
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