科研药盒，慎用于临床
蔗糖磷酸合成酶试剂盒操作说明书
SPS（HY-M0040）KIT
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS（EC2.4.1.14）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成
蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
检测原理：
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，
在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
试剂组成：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体2mL×1瓶，4℃保存
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体6mL×1瓶，4℃保存；
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL
提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（ul） 测定管 对照管 标准管 空白管
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样本 10 10 —— ——
蒸馏水 —— 45 45 45
试剂二 —— —— —— 10
试剂一 45 —— —— ——
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混匀，25℃准确水浴10min后
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试剂三 15 15 15 15
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沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却
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试剂四 210 210 210 210
试剂五 60 60 60 60
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混匀，沸水浴30min，冷却后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下测
定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。
SPS活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg/min/mgprot)=C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg/min/g鲜重)=C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白
管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷W
C标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入
提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间：10min。
本试剂盒主要技术指标：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9% 和 11%
生产批号：20200315
有效期：6个月
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北京华英生物技术研究所
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