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胰岛素样生长因子I

酶联免疫试剂盒使用说明书

IGF-1(HY-H0024)  ELISA   KIT

使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联免疫竞争法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

胰岛素样生长因子(Human InsuIin-Like Crowth Factor, IGF )于1957年由SaLmon和Daughaday发现,命名为生长价素(Somatomedin)。后经研究确认其结构与胰岛素相类似,具有生长调节作用,于1978年定名为IGF。IGF-1是由70个氨基酸残基组成的单链多肽,分子量7649,其1-29肽段顺序相似于胰岛素B链(B2-B30)顺序,42-62肽段顺序相似于胰岛素A链,其中间段明显区别于胰岛素原的连接肽区,为12肽,且结构差异较大。IGF-1具有促进生长发育、促进物质代谢、降低血糖及促进细胞分裂增殖的作用,与儿童发育异常代谢紊乱、糖尿病和肿瘤的发生发展关系密切。

标本收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。

药盒组成

1)        酶标试剂HRP 1 瓶。

2)        IGF-1抗体1瓶。

3)        IGF-1标准品6瓶,浓度为2550100200400800 ng/ml       

4)        终止液 1瓶。

5)        96微孔板1

6)        显色液1瓶。

7)        稀释液1

8)        洗涤液   

9)        说明书

10)     封板膜

11)     密封袋

 操作方法:

1)        标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):

2)        每孔加入抗体100ul包被2小时

3)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

4)        每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟

5)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

6)        每孔加入包被液25微升,标本25微升,标准品50ul轻轻晃动混匀

7)        每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟

8)        弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

9)        每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟

10)     每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11)     测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

 

 

注意事项

1.    2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.    各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3.    建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数

4.    严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5.    为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6.    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.    底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

a)         不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

b)   标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验

本试剂盒主要技术参数

    标准范围:0-800ng/ml

    灵敏度: <2.5 ng/ml

    正常参考值:180.5 ±40.2 ng/ml

规格:    96T/

保存:    2-8

有效期:  6个月(2-8℃)。

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