肝糖原/肌糖原检测试剂盒说明书

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糖原（glycogen）是一种动物淀粉，又称肝糖或糖元，由葡萄糖结合而成的支链多糖，其糖苷链为α型，是动物的贮备多糖。哺乳动物体内，糖原主要存在于骨骼肌（约占整个身体的糖原的2/3)和肝脏（约占1/3)中，其他大部分组织中，如心肌、肾脏、脑等，也含有少量糖原。低等动物和某些微生物（如真菌）中，也含有糖原或糖原类似物，糖原结构与支链淀粉相似。

检测原理：糖原在浓硫酸的作用下可以脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖原。

试剂组成：

试剂一：提取液  1瓶

试剂二：标准品  1瓶

试剂三：显色剂  1瓶

标本品推荐配制浓度：取10μL 10mg/mL葡萄糖标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.1 mg/mL葡萄糖溶液备用，现用现配。

操作步骤：

一、样本处理

1﹑细胞或细菌：收集500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75mL提取液超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移至10mL试管中，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧， 防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃ 离心10min，取上清液待测。

2﹑组织：称取0.1~0.2g样本，置于10mL试管中；加入0.75mL提取液，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧，防止 水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混 匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。

二、操作步骤

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                     空白管         标准管          样本

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蒸馏水（ml）  60     ——    ——

标准品 (ml）  ——    60     ——

待测样本(ml)  ——    ——    60

显色液 (ml)   240    240     240

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 混匀，沸水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL转移至微量比色皿或96孔板中，于620nm波长 处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为A1、A2 和A3。（空白管和标准管只要测1-2次）

计算结果

将标准品用蒸馏水进行倍比稀释后的单位浓度为横坐标，以对应管的吸光度OD值为纵坐标作图，待测管OD值在曲线上查出对应的浓度值。

全自动或半自动生化仪直接读取数据.

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